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羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒-實(shí)驗(yàn)原理

更新時(shí)間:2021-04-22      瀏覽次數(shù):1123

羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒-實(shí)驗(yàn)原理

 

測(cè)定意義:哺乳動(dòng)物CarE,也稱(chēng)脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類(lèi)似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān),有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。

測(cè)定原理:CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固籃顯色;在450 nm光吸收增加速率,計(jì)算CarE活性。

需要的儀器,耗材:紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

樣本處理

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液, 超聲波破碎細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);然后15000rpm,4℃,離心10min,取上清(若上清 不夠澄清,建議重復(fù)上述離心步驟),置于冰上待檢。

組織:按照組織質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)為1 : 5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn) 行冰浴勻漿。15000rpm,4℃,離心10min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復(fù)上述離心步驟),置于冰上待檢。
 

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