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上海ELISA試劑盒的檢測(cè)范圍和實(shí)驗(yàn)應(yīng)該注意的問(wèn)題

更新時(shí)間:2019-07-25      瀏覽次數(shù):1079
  上海ELISA試劑盒的檢測(cè)范圍和實(shí)驗(yàn)應(yīng)該注意的問(wèn)題
  ELISA實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問(wèn)題有:樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品與試劑混合、樣品添加、培養(yǎng)等。上海ELISA試劑盒具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),深受廣大用戶(hù)的喜愛(ài)。
  上海ELISA試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測(cè)樣本的種類(lèi):除試劑盒特別說(shuō)明外,一般不同種屬不能通用。常見(jiàn)待測(cè)樣本種類(lèi)有:血清和血漿(不同抗凝劑),細(xì)胞上清,和細(xì)胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用;
  上海ELISA試劑盒的檢測(cè)范圍:也就是標(biāo)曲范圍,特別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi),對(duì)于濃度很高的樣本,可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本。
  elisa中的稀釋線(xiàn)性及回收率:
  a.稀釋線(xiàn)性一般指樣本稀釋線(xiàn)性,是將樣本梯度稀釋下來(lái),看各稀釋梯度濃度是否成線(xiàn)性;參考樣本稀釋線(xiàn)性可以選擇樣本的稀釋倍數(shù);
  b.稀釋線(xiàn)性也有做加標(biāo)稀釋線(xiàn)性的情況,加標(biāo)稀釋線(xiàn)性是將標(biāo)準(zhǔn)品加入樣本中測(cè)定加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度測(cè)定是否準(zhǔn)確;同樣也是確定待測(cè)樣本稀釋倍數(shù)的參考指標(biāo)。一般線(xiàn)性和回收率的范圍在80%-120%比較合適;
  上海ELISA試劑盒的其它指標(biāo):
  a.靈敏度:試劑盒能夠檢測(cè)到的樣本低濃度的能力,如果待檢指標(biāo)含量很低,需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒;
  b.板間和板內(nèi)的變異系數(shù)(CV%):反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻,CV%一般小于10%比較好。
  試劑盒的有效期:試劑盒的有效期一般是半年至一年,樣本準(zhǔn)備時(shí)間需要考慮到試劑盒的有效期。
  ELISA法已被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體的測(cè)定中。ELISA的測(cè)定有許多影響因素。除了正常的反應(yīng)外,在檢測(cè)過(guò)程中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些錯(cuò)誤的結(jié)果。導(dǎo)致ELISA測(cè)定結(jié)果錯(cuò)誤的主要原因是:樣品因素;試劑因素;操作因素。
  上海ELISA試劑盒樣品稀釋
  常用產(chǎn)品的稀釋倍數(shù)由大量試驗(yàn)確定,以確保試驗(yàn)的敏感性和特異性。酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)是一種高度敏感的反應(yīng)。如果不稀釋血清,則不可避免地會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的非特異性反應(yīng)和假陽(yáng)性。
  二.工具包平衡
  所有ELISA試劑和試紙條應(yīng)在試驗(yàn)前與室溫(約25℃)保持平衡,并應(yīng)在室溫下放置20分鐘以上。過(guò)短的平衡時(shí)間會(huì)導(dǎo)致試劑混合不足、孵育時(shí)間縮短和ELISA反應(yīng)不足。在冬季低溫下,試劑盒可放置在37℃處20分鐘。
  三.樣品和試劑的混合
  上海ELISA試劑盒樣品在稀釋前后必須充分混合,所有試劑必須在加入樣品前搖勻,以確保試驗(yàn)的均勻性。
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